Desalificación de Oligonucleótidos

  1. Desalificación por Sep-Pak :

    Material y
    Soluciones
    • 1 Jeringa desechable de 10ml (nueva)
    • 1 Jeringa desechable de 3ml (nueva)
    • 1 Cartucho Sep-Pak C18
    • 3 Tubos eppendorff de 1.5ml
    • 5 ml de Acetonitrilo
    • 10 ml de Agua mQ estéril
    • 3 ml de una solución Acetonitrilo:Agua 50:50 v/v (Solución A)
    Procedimiento
    1. Lavar el Sep-Pak con 5ml de acetonitrilo
    2. Lavar el Sep-Pak con 5ml de agua
    3. Pasar lentamente el oligo disuelto en 1.5ml de agua y colectar el efluente
    4. Pasar dos veces mas el efluente colectado en el paso anterior
    5. Lavar con 3ml de agua y desechar el efluente
    6. Eluir con 3ml de la solución A colectando en los 3 tubos eppendorff (1 ml en c/u). El oligo se eluirá mayormente en el primer tubo
    7. Secar en Savant, resuspender en agua mQ y medir absorbancia a 260nm
    NOTAS
    • Los lavados y eluciones deben hacerse lentamente (2 gotas/seg) evitando la formación de burbujas en el Sep-Pak
    • La jeringa debe acoplarse horizontalmente por el lado mas largo del Sep-Pak y manipularse en forma vertical
    • Utilizar un Sep-Pak por cada oligo


  2. Desalificación con Etanol Absoluto :

    1. Concentrar a sequedad la solución de elución del oligo purificado por PAGE (Se formará una pastilla grande principalmente de urea)
    2. Agregar 1.0ml de Etanol ABSOLUTO
    3. Agitar vigorosamente en Vortex durante 1min
    4. Centrifugar a 13000 RPM durante 1min
    5. Eliminar la solución etanólica
    6. Repetir los pasos 2. a 5. hasta eliminar completamente las sales presentes (4 o 5 veces)
    7. Eliminar la solución etanólica y secar el precipitado en Savant
    8. Resuspender en Agua mQ estéril y medir absorbancia a 260nm

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